細胞培養技術(shù)注意事項

細胞培養技術(shù)注意事項大匯總:

1. 實(shí)驗進(jìn)行前，無(wú)菌室及無(wú)菌操作臺(laminar flow) 以紫外燈照射30-60 分鐘滅菌，以70 %ethanol 擦拭無(wú)菌操作抬面，并開(kāi)啟無(wú)菌操作臺風(fēng)扇運轉10 分鐘后，才開(kāi)始實(shí)驗操作。每次操作只處理一株細胞株，且即使培養基相同亦不共享培養基，以避免失誤混淆或細胞間污染。實(shí)驗完畢后，將實(shí)驗物品帶出工作臺，以70 % ethanol 擦拭無(wú)菌操作抬面。操作間隔應讓無(wú)菌操作臺運轉10 分鐘以上后，再進(jìn)行下一個(gè)細胞株之操作。

2. 無(wú)菌操作工作區域應保持清潔及寬敞，必要物品，例如試管架、吸管吸取器或吸管盒等可以暫時(shí)放置，其它實(shí)驗用品用完即應移出，以利于氣流之流通。實(shí)驗用品以 70 % ethanol 擦拭后才帶入無(wú)菌操作臺內。實(shí)驗操作應在抬面之中央無(wú)菌區域，勿在邊緣之非無(wú)菌區域操作。

3. 小心取用無(wú)菌之實(shí)驗物品，避免造成污染。勿碰觸吸管尖頭部或容器瓶口，亦不要在打開(kāi)之容器正上方操作實(shí)驗。容器打開(kāi)后，以手夾住瓶蓋并握住瓶身，傾斜約45° 角取用，盡量勿將瓶蓋蓋口朝上放置桌面。

4. 工作人員應注意自身之安全，須穿戴實(shí)驗衣及手套后才進(jìn)行實(shí)驗。對于來(lái)自人類(lèi)或是病毒感染之細胞株應特別小心操作，并選擇適當等級之無(wú)菌操作臺(至少 Class II)。操作過(guò)程中，應避免引起aerosol 之產(chǎn)生，小心毒性藥品，例如DMSO 及TPA 等，并避免尖銳針頭之傷害等。

5. 定期檢測下列項目： 5.1. CO2 鋼瓶之CO2壓力 5.2. CO2 培養箱之CO2濃度、溫度、及水盤(pán)是否有污染(水盤(pán)的水用無(wú)菌水，每周更換)。 5.3. 無(wú)菌操作臺內之a(chǎn)irflow 壓力，定期更換紫外線(xiàn)燈管及HEPA 過(guò)濾膜，預濾網(wǎng)(300小時(shí)/預濾網(wǎng)，3000 小時(shí)/HEPA)。

6. 水槽可添加消毒劑(Zephrin 1:750)，定期更換水槽的水。

7. 認真按照操作規程進(jìn)行實(shí)驗，一般不大會(huì )導致污染，很多情況下是由于所用的試劑或培養基有污染而使實(shí)驗失敗。

8. 粉末培養基配制好后(加了血清)，一般在4度盡量不要超過(guò)1個(gè)月，如在-20度存放時(shí)間可長(cháng)一些，但最好也不要超過(guò)3-4個(gè)月，可能對于永生化細胞株來(lái)說(shuō)要求不是太高，但我在過(guò)去的4年里一直是作原代 細胞培養 的，細胞嬌弱，經(jīng)驗表明放置時(shí)間不宜過(guò)長(cháng)。

9. 關(guān)于實(shí)驗用品的清洗與消毒，我的經(jīng)驗是：用過(guò)的玻璃器皿先在清水中浸泡30min以上，然后加少許清洗劑，以超聲波洗滌30min左右，(如無(wú)超聲波洗滌器可用軟毛刷輕輕刷洗干凈)，撈出晾干，再在鉻酸洗液中浸泡6-18h(或過(guò)夜)后，自來(lái)水清洗10-15遍，雙蒸水清洗3-4遍，晾干，高壓消毒后即可使用。

10. 許多塑料制品也可以高壓消毒，例如培養瓶蓋，膠塞，吸頭等。不能用于高壓的一般均已制成一次性作用的商品了，當然如果 money有限，如進(jìn)口的培養板、皿等，也可以重復使用1-2次，我當時(shí)使用方法是將其清潔后，使用前在紫外燈下敞開(kāi)照射1-1.5h即可，我做過(guò)多次，沒(méi)有出現問(wèn)題。塑料培養瓶由于清洗消毒不便，最好不要重復使用，如一定要重復用，可用環(huán)氧乙烷等消毒，(消毒后一定要放置半年以上方可使用)。

11. 在光鏡下，上皮細胞通常呈“鋪路石"樣排布，細胞之間有拉絲現象(即距離較遠的細胞可以通過(guò)細長(cháng)的觸手相連)，細胞有成片生長(cháng)的特性。而間質(zhì)細胞通常呈梭形，沒(méi)有有成片生長(cháng)的特性，細胞之間的聯(lián)系不緊密。但是細胞的形態(tài)特征會(huì )因為生長(cháng)條件的改變而改變，如HeLa細胞是上皮細胞，但是在酸性培養條件下會(huì )變?yōu)樗笮巍?/p>