熒光分光光度計的操作步驟

點(diǎn)擊次數：355 更新時(shí)間：2024-06-20

熒光分光光度計是一種定性、定量分析的儀器。通過(guò)熒光光譜儀的檢測，可以獲得物質(zhì)的激發(fā)光譜、發(fā)射光譜、量子產(chǎn)率、熒光強度、熒光壽命、斯托克斯位移、熒光偏振與去偏振特性，以及熒光的淬滅方面的信息。

熒光分光光度計的操作步驟：

1.開(kāi)機：接通電源，打開(kāi)主機開(kāi)關(guān)，點(diǎn)燃(打開(kāi))光源后,根據說(shuō)明書(shū)要求啟動(dòng)計算機。

2.檢測前準備：參照儀器說(shuō)明書(shū),在20天內至少進(jìn)行一次激發(fā)校準和發(fā)射校準，檢測前儀器應預熱。

3.工作條件的選擇：環(huán)境溫度應在20°C土5°C;相對濕度不大于70%;電源穩定，無(wú)磁場(chǎng)、電場(chǎng)干擾。根據樣品的特性及熒光強度,選擇合適的儀器工作條件(如狹縫、PM增益、響應時(shí)間等)。

4.基本測定

(1)熒光激發(fā)光譜測定

設置儀器參數，掃描發(fā)射波長(cháng)，找到maxhem，以此為發(fā)射波長(cháng)，記錄發(fā)射強度作為激發(fā)波長(cháng)的函數，便得到激發(fā)光譜。

(2)英光發(fā)射光譜測定

設置儀器參數，掃描激發(fā)波長(cháng)，找到maxhex以此為激發(fā)波長(cháng)，記錄發(fā)射強度與發(fā)射波長(cháng)間的函數關(guān)系，便得到熒光發(fā)射光譜。

(3)差譜測定

設置儀器參數，選擇合適的工作方式，測定背景溶液的發(fā)射光譜并儲存起來(lái)，在一定的工作方式下掃描樣品溶液的發(fā)射波長(cháng)，得到當時(shí)的光度值和儲存的背景值之間的差示值，即差譜。

(4)峰面積積分

選擇適當的工作方式，對樣品溶液進(jìn)行積分操作，即得到峰面積積分。

(5)熒光強度

選擇合適的測量參數，設置入ex、hem，采用定點(diǎn)讀數或掃描方式，即可測得所選波長(cháng)處的熒光強度。

(6)定量測定

配制一系列已知濃度的標準溶液，在一定的測定條件下，設置入ex、入em，按照由稀至濃的次序，測定標準溶液的熒光強度，繪制熒光強度一濃度的工作曲線(xiàn)，不改變儀器參數測定未知溶液的熒光強度由工作曲線(xiàn)即可求出未知溶液的濃度。